Доктор Хаус (в исполнении английского актёра Хью Лори, получившего за эту роль «Золотой Глобус» в 2006 и 2007 годах) — блестящий диагност с двумя основными специализациями: заболеваний почек (нефрология) и в области инфекционных болезней, но из-за некоторых особенностей его характера его нельзя назвать любимцем пациентов и коллег — он замкнут, резок и циничен, склонен к мизантропии и бунтарству. Он не обременяет себя соблюдением правил хорошего тона, и временами кажется, что он полностью лишён чувства сострадания (что, однако, неверно). Лучше всего говорят о жизненной позиции Хауса слова доктора Формана: «Он не нарушает правила, он их игнорирует», его любимое утверждение — «Все лгут». Как ни странно, именно этот подход нередко помогает ему разобраться в самых сложных и невероятных случаях, а значит спасти жизнь ещё одному пациенту.

Его ассистенты — молодые и многообещающие врачи — иммунолог Эллисон Кэмерон (Дженнифер Моррисон), невролог Эрик Форман (Омар Эппс) и реаниматолог Роберт Чейз (Джесси Спенсер). В четвёртом сезоне появляются новые ассистенты Тринадцатая (Реми Хадли) (Оливия Уайлд), Лоренс Катнер (Кэл Пенн) и Крис Тауб (Питер Джейкобсон).

Другие его соратники — доктор Джеймс Уилсон (Роберт Шон Леонард), онколог и, возможно, единственный друг Хауса, и доктор Лиза Кадди (Лиза Эдельстин), эндокринолог, а также заведующая больницей.

Хаус часто выражает глубокое и укоренившееся разочарование в людях, но, возможно, его язвительность объясняется хронической болью в ноге (инфаркт четырёхглавой мышцы правого бедра), из-за чего он ходит с тростью. Хаус постоянно принимает викодин (вплоть до начала 6-ого сезона) от боли в ноге (и имеет зависимость от него), а также когда какое-то дело утомляет или раздражает его.

Большинство эпизодов начинается вне стен Принстон-Плейнсборо (англ. Princeton-Plainsboro), клинической больницы, где работает Хаус. В начале эпизода, как правило, показаны события, которые предшествуют проявлению симптомов у пациента. На протяжении эпизода команда врачей пытается определить болезнь, вызывающую эти симптомы. Команда приходит к диагнозу, используя метод дифференциальной диагностики, при этом Хаус руководит обсуждением диагноза.

Часто болезнь невозможно сразу определить, потому что пациент солгал о симптомах и обстоятельствах, приведших к неизвестной болезни (например, любовном романе на стороне, о работе, вызвавшей болезнь, и т. д.), хотя пациент, как правило, не осознает важности утаённой информации. В связи с этим Хаус часто говорит «все лгут» или «пациент лжёт» в процессе обсуждения.

Нежелание Хауса выполнять обязательства по работе в клинике — частый дополнительный сюжет сериала. В клинике Хаус работает с пациентами в своей обычной эксцентричной и остроумной манере, часто предлагая нетрадиционные методы лечения и удивляя пациентов быстрыми и точными диагнозами после того, как он, казалось, практически не обращал на них внимания. Пациенты из клиники часто становятся мишенями фирменной иронии и остроумия Хауса.

Кроме интересных медицинских случаев (которые в зависимости от конкретного случая имеют более или менее реальную медицинскую подоплёку), в сериале раскрываются отношения Хауса со своими коллегами и друзьями. Со своей своеобразной жизненной философией и противоречивым обаянием, он любит испытывать людей и наблюдать за ними. Но люди, в свою очередь, тоже влияют на характер Хауса; и как они, так и он, хотя и противопоставляет себя окружающим, открывает при этом взаимодействии что-то новое для себя.

Основная статья: Список персонажей телесериала «Доктор Хаус»

В первых трёх сезонах членами команды Хауса были Форман, Кэмерон и Чейз. В конце третьего сезона Форман и Кэмерон увольняются, а Чейза увольняет сам Хаус. В начале четвёртого сезона Хаус нанимает сорок докторов, список которых он сокращает до Тауба, Катнера и Тринадцатой (в серии «Игры»). Чейз и Кэмерон до сих пор работают в учебном госпитале Принстон-Плейнсборо. Формана возвращает на работу к доктору Хаусу Лиза Кадди. Начиная с 4-го сезона в команде Хауса 4 врача, а не три, как в первых трёх сезонах. В шестом сезоне Форман возглавляет команду, Тауб уходит (из-за ухода Хауса), затем Форман увольняет 13. Форман остаётся один и приглашает обратно Кэмерон и Чейза. И сразу же возвращается Хаус (хотя сначала он официально не может работать, поскольку лишен лицензии). Таким образом, команда работает в прежнем составе: Форман, Кэмерон и Чейз.

Хью Лори — Грегори Хаус
Лиза Эдельстин — Лиза Кадди
Роберт Шон Леонард — Джеймс Уилсон
Омар Эппс — Эрик Форман
Дженнифер Моррисон — Эллисон Кэмерон
Джесси Спенсер — Роберт Чейз
Питер Джейкобсон — Крис Тауб
Кэл Пенн — Лоренс Катнер
Оливия Уайлд — Реми Хадли (Тринадцатая)